來自復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的研究人員發(fā)現(xiàn)，利用Talen技術(shù)剔除被感染細(xì)胞中的乙型肝炎病毒（HBV）可以作為一種治療乙型肝炎的新策略。
乙肝病毒(hepatitis B virus)感染會(huì)導(dǎo)致人類急、慢性乙型肝炎。據(jù)世界性衛(wèi)生組織報(bào)道，約20億人曾感染過乙肝病毒(hepatitis B virus)，其中3.5億人為慢性乙肝病毒(hepatitis B virus)感染者，每年約有100萬人死于乙肝病毒(hepatitis B virus)感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝癌（HCC）。目前治療乙肝的藥物主要是干擾素和核酸類似物，用于抑制乙肝病毒(hepatitis B virus)的復(fù)制，但是這些藥物不能*清除已經(jīng)存在于患者細(xì)胞核的病毒。
復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院袁正宏教授及其博士研究生陳捷亮利用的的FastTALE Talen技術(shù)，設(shè)計(jì)了靶向不同基因型乙肝病毒(hepatitis B virus)的保守區(qū)序列的Talen，導(dǎo)入細(xì)胞和模型小鼠后，可以特異結(jié)合并切割病毒基因組，導(dǎo)致病毒HBeAg, HBsAg, HBcAg 和pgRNA以及cccDNA的表達(dá)與合成減少。同時(shí)發(fā)現(xiàn)針對(duì)乙肝病毒(hepatitis B virus)的Talen和干擾素α聯(lián)合使用可以使抑制病毒復(fù)制的效果增強(qiáng)。這個(gè)研究提示Talen和干擾素α的聯(lián)合用藥可能為治療慢性乙肝提供更優(yōu)化的治療方案。同時(shí)，也為其他病毒性疾病的研究和治療提出了新的思路。
該研究成果發(fā)表在近日的《Molecular Therapy》雜志上。參與本項(xiàng)研究的單位還有復(fù)旦大學(xué)公共衛(wèi)生應(yīng)用中心及復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所
背景介紹：
TALEN 技術(shù)（Transcription activator–like effector Nuclease）是一種新的定點(diǎn)基因修飾技術(shù)，是基于植物病原體黃單胞菌( Xanthomonas)分泌的一種轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)因子( transcription activator–like effector，TALE) 可以識(shí)別DNA序列的原理而設(shè)計(jì)和構(gòu)建靶向特異基因的TALE蛋白的技術(shù)。TALE蛋白的DNA結(jié)合域是由可以識(shí)別單個(gè)核苷酸堿基的氨基酸序列模塊串聯(lián)而成的，氨基酸序列與其靶位點(diǎn)的核酸序列有恒定的對(duì)應(yīng)關(guān)系。
TALEN 技術(shù)是將TALE 蛋白中的DNA結(jié)合域與FokI 核酸內(nèi)切酶的切割域融合，設(shè)計(jì)和構(gòu)建能在特定基因位點(diǎn)產(chǎn)生雙鏈斷裂的的技術(shù)。雙鏈斷裂可以極大的提高斷裂位點(diǎn)周圍的基因修復(fù)活性，利用易錯(cuò)修復(fù)(非同源末端聯(lián)結(jié))或者同源重組修復(fù)的方式實(shí)現(xiàn)特異位點(diǎn)DNA的改造，例如定點(diǎn)基因敲除 (Knock-out) 、基因敲入 (Knock-in) 或點(diǎn)突變修飾等等。該技術(shù)成功解決了RNAi技術(shù)中knockdown效率低下的問題，同時(shí)也克服了鋅指核酸酶（ZFN）技術(shù)篩選復(fù)雜、成本過高的缺點(diǎn)，也可以避免Crispr/CAS9造成的嚴(yán)重脫靶，使定點(diǎn)基因修飾（Knock out、Knock in等）工作變得更為和便捷。TALEN技術(shù)現(xiàn)已成功應(yīng)用于動(dòng)物（人類、鼠、、魚、家蠶等）、植物（煙草、水稻(Rice)、擬南芥(Arabidopsis thaliana)等）、微生物（酵母、病毒等），無基因序列、細(xì)胞類型和物種的限制利用。過去，將高度重復(fù)的Tale氨基酸模塊連接在一起相當(dāng)困難，F(xiàn)astTALE技術(shù)的出現(xiàn)解決了這個(gè)問題，可以很容易地在1天內(nèi)完成TALEN的構(gòu)建。
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