血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多原因,但普遍的原因是血清中脂蛋白的變性所造成的,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會(huì)存在于血清中,也是造成沉淀物的原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。
按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:
(1)解凍胎牛血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
(2)胎牛血清分裝凍存時(shí),須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。
(3)勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
(4)勿將胎牛血清置于37℃太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。
(5)胎牛血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
(6)若必須做胎牛血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。
若欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。不使用過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)樗赡茏枞^過濾膜。