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技術(shù)詳解:免疫血清純化抗體操作
更新時間:2015-03-30 點擊次數(shù):1964

 

疫血清 (immune serum)亦稱抗血清。含有抗體的血清制劑。種類很多,包括抗毒素、抗菌血清、抗病毒血清、抗Rh血清等。關(guān)于免疫血清純化抗體的詳細操作步驟我公司專業(yè)技術(shù)提供專業(yè)的技術(shù)指導(dǎo)。如下:

1. 剪取一小條0.45 μm 的硝酸纖維膜,置于1.5ml eppendorf 管中,浸沒于1 ml
1 mg/ml 的抗原溶液中,5 min。
2. 取出膜,置于濾紙上干燥。
3. 將膜放置于裝有1 ml Buffer A 的eppendorf 管,輕輕震蕩混勻30 min。
4. 移去Buffer A,用新鮮的Buffer A 洗一次,將膜浸沒于0.8-1 ml 相應(yīng)的抗血
清中,1-2 h, 于混勻器上輕輕震蕩混勻。
5. 移去血清,用PBS 洗膜,4 次,每次5 min。
6. 洗脫抗體
新配置100 mM 甘氨酸(pH 2.5)抗體洗脫液,將膜置于洗液中,手輕搖
混勻2 min,迅速將洗液轉(zhuǎn)移至裝有100 μl 1 M Tris(pH 8.0)中和,使抗體
復(fù)性。第1 次洗脫用400 μl 抗體洗脫液,第2,3 次用200 μl。
7. 往洗脫下來的液體中加入100 μl Buffer A 以穩(wěn)定抗體,并分裝成30 μl 每管,
于-20℃保存。
注:所有步驟均在室溫完成。

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